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间接免疫荧光法原理

　　间接免疫荧光法是一种抗核抗体检验方法，主要用于自身免疫性疾病的筛查，有高敏感度、方法简易以及覆盖面广等优点。

　　间接免疫荧光法是先把特异性抗体跟标本中的抗原反应，然后再用荧光素标记抗体跟之前的复合物中第一抗体结合，最后，经过洗涤后在荧光显微镜下做观察，从而达到检测未知抗体或抗原的目的，通过该检测快速对自身抗体和病原体做检测和鉴定，比如可以用于筛查自身免疫性疾病、流感以及狂犬病等。

　　另外，角膜荧光法检测，还可以用于准确测量斜视的度数，主要包括更替遮住和遮住气遮住两种情况，其中更替遮住主要用于筛查病人是否存在斜视症状，如果存在异常情况，就需要再做遮住去遮住检测复查，如果还是存在异常情况，就表示病人有斜视症状，但如果复查病人的眼位可以快速逆位，就属于是隐斜视，通过佩戴角膜塑形眼镜能达到矫正的目的。

　　在做荧光法检测前一天、不能吃太油腻以及高蛋白食物，还要注意不能大量喝酒，因为酒精成分会影响检查结果的准确性，另外，该检测需要空腹做，所以一般需要前一天晚8点以后禁食。

免疫荧光 定位

　　你所说的方法是采用荧光素分子直接标记抗体，在免疫荧光中被称为直接法。

　　更多的做法不是采用直接法而是采用间接法，也就是用对应某一种抗原的抗体（这里被称为一抗）与细胞孵育结合，在采用对应一抗（也就是抗一抗）的抗体（这里被称为二抗，二抗上偶联有荧光素分子）与细胞孵育结合后在荧光显微镜下观察。

　　间接法较直接法能够有效降低背景荧光，提高信噪比，同时由于抗体的放大效应使得检测灵敏度大大提升。

　　我就在做这方面的研究工作，如果需要的话可以共同探讨。

　　举例：对细胞微管蛋白进行亚细胞定位，，用低聚甲醛固定细胞，NP-40穿孔，选择抗微管蛋白的抗体作为一抗，孵育后洗脱去背景，加入偶联荧光素的二抗孵育后洗脱去背景，，上荧光显微镜观察。

　　希望能够对你有所帮助。