蛋白质含量检测方法
？蛋白质含量的测定是我们判断每一种食物是否含有高蛋白
，所以我们建议大家应该要对于蛋白质的检测方法有一定的认识
。关于蛋白质含量检测方法以及蛋白质含量检测方法
，测定蛋白质浓度的方法
，蛋白质测定的方法
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，中华健康在线将为你整理以下的日常知识
：


蛋白质含量检测方法

　　蛋白质含量的测定是我们判断每一种食物是否含有高蛋白
，所以我们建议大家应该要对于蛋白质的检测方法有一定的认识
。

　　一般我们在生活中检查蛋白质含量的方法是通过硫酸铜的方法
，也可以通过酚试剂的方法
，所以大家觉得哪种方法比较方便
，我们建议大家可以尝试一下文章介绍的方法
。

　　双缩脲法(Biuret法)灵敏度低1～20mg中速20~30分钟多肽键+碱性Cu2+紫色络合物硫酸铵;Tris缓冲液;某些氨基酸用于快速测定
，但不太灵敏;不同蛋白质显色相似
。

　　紫外吸收法较为灵敏50～100mg快速5～10分钟蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基在280nm处的光吸收各种嘌吟和嘧啶;

　　Folin-酚试剂法(Lowry法)灵敏度高～5mg慢速40～60分钟双缩脲反应;磷钼酸-磷钨酸试剂被Tyr和Phe还原硫酸铵;Tris缓冲液;甘氨酸;各种硫醇耗费时间长;操作要严格计时;颜色深浅随不同蛋白质变化
。

　　考马斯亮蓝法(Bradford法)灵敏度最高1～5mg快速5～15分钟考马斯亮蓝染料与蛋白质结合时
，其lmax由465nm变为595nm强碱性缓冲液;

　　SDS最好的方法;干扰物质少;颜色稳定;颜色深浅随不同蛋白质变化
。

　　硫酸铜法
：
称取0.2g硫酸铜
，6g硫酸钾
，把0.5g粉碎好的大豆(不用测量水分的)用滤纸包好放入定氮瓶中中
，加20ml硫酸
，(瓶口上放一个小漏斗
，防止蛋白跑掉)小火在电炉子上消化
，等没有碳化颗粒
，并处于澄清状态时
，拿下来凉一会
。

　　再加过氧化氢直到把瓶颈上的蛋白冲洗干净为止
，再消化30分钟
。

　　拿下来
，等凉
。

　　通过这篇文章对于蛋白质含量测定方法的介绍
，我们应该都知道如何在生活检查蛋白质的含量
，所以我们建议大家应该要对于蛋白质的测定方法进行分析
。

　　一般我们在生活中检测蛋白质的方法是比较多的
，希望你们可以采纳文章介绍的方法
。

常用的蛋白质含量测定方法有哪些

　　　①凯氏定氮法

　　　　原理
：
蛋白质平均含氮量为16%
。

　　当样品与浓硫酸共热
，蛋白氮转化为铵盐
，在强碱性条件下将氨蒸出
，用加有指示剂的硼酸吸收
，最后用标准酸滴定硼酸
，通过标准酸的用量即可求出蛋白质中的含氮量和蛋白质含量
。

　　　　②双缩脲法

　　　　原理
：
尿素在180℃下脱氨生成双缩脲
，在碱性溶液中双缩脲可与Cu2+形成稳定的紫红色络合物
。

　　蛋白质中的肽键实际上就是酰胺键
，故多肽
、
蛋白质等都有双缩脲（biuret）反应
，产生蓝色或紫色复合物
。

　　比色定蛋白质含量
。

　　　　缺点
：
灵敏度低
，样品必须可溶
，在大量糖类共存和含有脯氨酸的肽中显色不好
。

　　其 精确度 较差 (数mg)
，且会受样品中 硫酸铵 及 Tris 的干扰
，但 准确度 较高
，不受蛋白质的种类影响
。

　　　　③Folin酚法(Lowry)

　　　　Folin酚法是biuret 法的延伸
，所用试剂由试剂甲和乙两部分组成
。

　　试剂甲相当于双缩脲试剂（碱性铜试剂）
，试剂乙中含有磷钼酸和磷钨酸
。

　　　　在碱性条件下
，蛋白质中的巯基和酚基等可将Cu2+还原成Cu+
， Cu+能定量地与Folin－酚试剂反应生成蓝色物质
，600nm比色测定蛋白质含量
。

　　　　灵敏度较高(约 0.1 mg)
，但较麻烦
，也会受 硫酸铵 及 硫醇化合物 的干扰
。

　　 步骤中各项试剂的混合
，要特别注意均匀澈底
，否则会有大误差
。

　　　　④紫外法

　　　　280nm光吸收法
：
利用Tyr在280nm在吸收进行测定
。

　　　　280nm-260nm的吸收差法
：
若样品液中有少量核酸共存按下式计算
：


　　　　蛋白质浓度(mg/ml)=1.24E280-0.74E260 （280 260为角标）

　　　　⑤色素结合法（Bradford 法）

　　　　直接测定法
：
利用蛋白质与色素分子（Coomassie Brilliant Blue G-250）结合物的光吸收用分光光度法进行测定
。

　　　　考马斯亮兰（CBG）染色法测定蛋白质含量
。

　　CBG 有点像指示剂
，会在不同的酸碱度下变色；在酸性下是茶色
，在中性下为蓝色
。

　　当 CBG接到蛋白质上去的时候
，因为蛋白质会提供 CBG一个较为中性的环境
，因此会变成蓝色
。

　　当样本中的蛋白质越多
，吸到蛋白质上的CBG也多
，蓝色也会增强
。

　　因此
，蓝色的呈色强度
，是与样本中的蛋白质量成正比
。

　　　　间接测定法
：
蛋白质与某些酸性或碱性色素分子结合形成不溶性的盐沉淀
。

　　用分光光度计测定未结合的色素
，以每克样品结合色素的量来表示蛋白质含量的多少
。

　　　　⑥BCA法

　　　　BCA（Bicinchoninc acid procedure
，4,4’-二羧-2,2’-二喹啉）法与Lowry法相似
，主要差别在碱性溶液中
，蛋白质使Cu2+转变Cu+后
，进一步以BCA 取代Folin试剂与Cu+结合产生深紫色
，在波长562 nm有强的吸收
。

　　　　它的优点在于碱性溶液中BCA 比Folin试剂稳定
，因此BCA与碱性铜离子溶液结合的呈色反应只需一步骤即完成
。

　　灵敏度Lowry法相似
。

　　　　本方法对于阴离子
、
非离子性及二性离子的清洁剂和尿素较具容忍度
，较不受干扰
，但会受还原糖 及EDTA的干扰
。

　　　　⑦胶体金测定法

　　　　胶体金(colloidal gold)是氯金酸(chloroauric acid)的水溶胶
，呈洋红色
，具有高电子密度
，并能与多种生物大分子结合
。

　　　　胶体金是一种带负电荷的疏水胶体遇蛋白质转变为蓝色
，颜色的改变与蛋白质有定量关系
，可用于蛋白质的定量测定
。

　　　　⑧其他方法

　　　　有些蛋白质含有特殊的 非蛋白质基团
，如 过氧化物酶含有 亚铁血红素基团
，可测 403 nm 波长的吸光来定量之
。

　　 含特殊金属的酶 (如镉)
，则可追踪该金属
。