革兰染色法的具体方法？很多人对革兰染色法都不了解是怎么回事，这是一种在细胞学很常使用的一种鉴别染色方法，是一种复染发，在一八八四年一个丹麦医生发明的染色方法，分为四个步骤，初染、媒染、脱色、复染等等。关于革兰染色法的具体方法以及革兰染色法的具体方法，什么叫革兰染色法，革兰染色法最关键的一步，革兰染色法的过程，革兰染色法过程等问题，中华健康在线将为你整理以下的日常知识：

革兰染色法的具体方法

　　很多人对革兰染色法都不了解是怎么回事，这是一种在细胞学很常使用的一种鉴别染色方法，是一种复染发，在一八八四年一个丹麦医生发明的染色方法，分为四个步骤，初染、媒染、脱色、复染等等。

　　大多数人对于革兰染色法的步骤不了解，下面让小编给大家介绍。

　　革兰染色法的步骤。

　　第一，革兰染色法的步骤是什么？操作步骤：涂片将培养的不同菌分别作涂片(注意涂片切不可过于浓厚)，干燥、固定。

　　固定时通过火焰1一2次即可，不可过热，以载玻片不烫手为宜。

　　.染色(1)初染加草酸铰结晶紫一滴，约一分钟，水洗。

　　(2)媒染滴加碘液冲去残水，并覆盖约一分钟，水洗。

　　3)脱色将载玻片上面的水甩净，并衬以白背景，用95%酒精滴洗至流出酒精刚刚不出现紫色时为止，约20一30秒钟，立即用水冲净酒精。

　　(4)复染用番红液染1一2分钟，水洗。

　　(5)镜检干燥后，置油镜观察.革兰氏阴性菌呈红色，革兰氏阳性菌呈紫色。

　　以分散开的细菌的革兰氏染色反应为准，过于密集的细菌，常常呈假阳性。

　　6)同法在一载玻片上以大肠杆菌与枯草芽孢杆菌混合制片，作革兰氏染色对比。

　　革兰氏染色的关键在于严格掌握酒精脱色程度，如脱色过度，则阳性菌可被误染为阴性菌;而脱色不够时，阴性菌可被误染为阳性菌。

　　此外，菌龄也影响染色结果，如阳性菌培养时间过长，或已死亡及部分菌自行溶解了，都常呈阴性反应。

　　第二，革兰氏染色反应是细菌分类和鉴定的重要性状。

　　它是1884年由丹麦医师Gr二创立的。

　　革兰氏染色法(Gramstain)不仅能观察到细菌的形态而且还可将所有细菌区分为两大类：染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，用G+表示：染色反应呈红色(复染颜色)的称为革兰氏阴性细菌，用G一表示。

　　细菌对于革兰氏染色的不同反应，是由于它们细胞壁的成分和结构不同而造成的。

　　革兰染色法的步骤，革兰氏阳性细菌的细胞壁主要是由肤聚糖形成的网状结构组成的，在染色过程中，当用乙醇处理时，由于脱水而引起网状结构中的孔径变小，通透性降低，使结晶紫一碘复合物被保留在细胞内而不易脱色，因此，呈现蓝紫色;革兰氏阴性细菌的细胞壁中肤聚糖含量低，而脂类物质含量高，当用乙醇处理时，脂类物质溶解，细胞壁的通透性增加，使结晶紫一碘复合物易被乙醇抽出而脱色，然后又被染上了复染液(番红)的颜色，因此呈现红色。

什么是革兰染色法？

　　方法概述

　　　　革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，1884年由丹麦医师、细菌学家 Christain Gram创立。

　　细菌先经碱性染料结晶染色，而经碘液媒染后，用酒精脱色，在一定条件下有的细菌此色不被脱去，有的可被脱去，因此可把细菌分为两大类，前者叫做革兰氏阳性菌（G+），后者为革兰氏阴性菌（G—）。

　　为观察方便，脱色后再用一种红色染料如碱性蕃红、稀释复红等进行复染。

　　阳性菌仍带紫色，阴性菌则被染上红色。

　　有芽胞的杆菌和绝大多数的球菌，以及所有的放线菌和真菌都呈革兰氏正反应；弧菌，螺旋体和大多数致病性的无芽胞杆菌都呈现负反应。

　　革兰氏阳性菌对青霉素敏感，革兰氏阴性菌对链霉素敏感。

　　可根据革兰氏染色法鉴别不同菌种并对症下药。

　　革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌在化学组成和生理性质上有很多差别，染色反应不一样。

　　现在一般认为革兰氏阳性菌体内含有特殊的核蛋白质镁盐与多糖的复合物，它与碘和结晶紫的复合物结合很牢，不易脱色，阴性菌复合物结合程度底，吸附染料差，易脱色，这是染色反应的主要依据。

　　 另外，阳性菌菌体等电点较阴性菌为低，在相同PH条件下进行染色，阳性菌吸附碱性染料很多，因此不易脱去，阴性菌则相反。

　　所以染色时的条件要严格控制。

　　例如，在强碱的条件下进行染色，两类菌吸附碱性染料都多，都可呈正反应；PH很低时，则可都呈负反应。

　　此外，两类菌的细胞壁等对结晶紫—碘复合物的通透性也不一致，阳性菌透性小，故不易被脱色，阴性菌透性大，易脱色。

　　所以脱色时间，脱色方法也应严格控制。

　　染色原理

　　　　G﹢菌：细胞壁厚，肽聚糖网状分子形成一种透性障，当乙醇脱色时，肽聚糖脱水而孔障缩小，故保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上。

　　呈紫色。

　　Gˉ菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，其脂含量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，番红染液复染后呈红色。

　　操作流程

　　　　革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是： 　　

　　（1）载玻片固定。

　　在无菌操作条件下，用接种环挑取少量细菌于干净的载玻片上涂布均匀，在火焰上加热以杀死菌种并使其粘附固定。

　　（2）草酸铵结晶紫染1分钟。

　　（3）自来水冲洗，去掉浮色。

　　（4) 用碘-碘化钾溶液媒染1分钟，倾去多余溶液。

　　（5）用中性脱色剂如乙醇（95%）或丙酮酸脱色30秒，革兰氏阳性菌不被褪色而呈紫色，革兰氏阴性菌被褪色而呈无色。

　　（6）用蕃红染液复染30秒，革兰氏阳性菌仍呈紫色，革兰氏阴性菌则呈现红色。

　　革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌即被区别开。